選擇處于指數(shù)生長期的細胞,按照常規(guī)方法收集貼壁細胞或懸浮細胞于離心管中。
1000 rpm-2000 rpm,離心 5 分鐘,收集培養(yǎng)細胞沉淀,棄上清液。
加入適量 4℃預(yù)冷的 BIOHUB 無血清細胞凍存液重懸細胞,制成細胞懸液。 (按照細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存液的量,推薦凍存密度:1x106 至 5x106cells/mL。)
將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中,建議每管 1mL 或 1.5mL。
在 15 mL 離心管中加入 5-10 mL 平衡至室溫的wan全培養(yǎng)基。
從-80℃冰箱/液氮中取出凍存的細胞,立即放入 37℃水浴鍋或其他細胞復(fù)蘇設(shè)備中,迅速解凍。
將凍存管中的細胞懸液逐滴轉(zhuǎn)移至預(yù)先準備好的含wan全培養(yǎng)基的離心管中,1000 rpm-1500 rpm,離心 5 分鐘,收集細胞沉淀,棄上清(操作時小心,切勿將細胞沉淀移去)。
加入適量平衡至室溫的wan全培養(yǎng)基重懸細胞,接種到事先準備好的培養(yǎng)容器中,輕輕搖晃培養(yǎng)容器,使細胞分布均勻。
鏡檢細胞后,可根據(jù)各自研究的需要和方法進行細胞常規(guī)培養(yǎng)。培養(yǎng) 5-24h 后,觀察細胞狀態(tài),可視情況更換鮮細胞培養(yǎng)液。
細胞凍存 6 個月后復(fù)蘇,對復(fù)蘇后的細胞進行臺盼藍染色,統(tǒng)計細胞存活率
本產(chǎn)品可-30℃至-10℃保存,若長期不用,再次使用時,請在 2-8℃或室溫(22-25℃,不超過 4小時)融化 ;
避免反復(fù)凍融;
使用此無血清細胞凍存液凍存細胞后,應(yīng)盡量減少凍存細胞在外存放時間,盡快移入-80℃超低溫冰箱長期保存;
BIOHUB 無血清細胞凍存液(藥用級)含有 DMSO,部分對 DMSO 敏感的細胞、淋巴細胞或干細胞凍存,建議使用本產(chǎn)品對其進行試驗性凍存、復(fù)蘇、培養(yǎng),確認性能后再進行正式凍存;
該產(chǎn)品在室溫條件下放置的時間不宜過長,以免影響凍存效率;
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
78EC10001-100ml | 無血清細胞凍存液 | 100ml | BIOHUB |
78EC10001-500ml | 無血清細胞凍存液 | 500ml | BIOHUB |