組成
Component | 78GD10081-100mL | 78GD10081-500ML |
蘇木素染液 | 100 mL | 500 mL |
伊紅染液(醇溶) | 100 mL | 500 mL |
1. 樣本前處理
(1) 對于石蠟切片:切片依次經二甲苯脫蠟10 min,更換新鮮的二甲苯脫蠟10 min,無水乙醇 5min,新鮮無水乙醇5 min,90%乙醇5 min,75%乙醇5 min,自來水洗。
(2) 對于冰凍切片:-20℃保存的冰凍切片需靜置5-10 min恢復至室溫。如需固定,則經所需固定液室溫后自來水洗。
2. HE染色
(1) 蘇木素染色:上述處理好的切片,進入蘇木素染液染色3-5 min,自來水洗;
(2) 分化:切片經蘇木素分化液2-5 s,自來水流水充分沖洗;
(3) 返藍:蘇木素返藍液返藍2-5 s,自來水流水充分沖洗;
(4) 伊紅染色:切片依次經85%、95%梯度乙醇脫水,各5 min。然后進入伊紅染液(醇溶)中染色5 min,經兩次無水乙醇脫水各5 min;
(5) 透明:切片再經新鮮無水乙醇脫水5 min,二甲苯透明5 min,更換新鮮的二甲苯再透明5 min。
(6) 封片:滴加中性樹膠進行封片。
1. 染色后用特定溶液將組織中過多結合的染液脫去,這個過程稱為分化作用,所用溶液稱為分化液。在HE染色種常用低濃度鹽酸作為分化液,因為酸能破壞蘇木素的醌型結構結構,使色素與組織分離而褪色。組織在經蘇木素染色后,必須經過分化去除組織中過多結合及非特異性吸附的染料,才能進行伊紅染色,確保細胞核與胞漿顯色分明。可使用78NB10002蘇木素分化液。分化過程中,根據組織切片厚度、組織類型等結合鏡下觀察適當調整分化時間。
2. HE染色中蘇木素染色后的返藍很重要。蘇木素在酸性條件下為離子狀態(tài),呈紅色;在堿性條件下呈藍色。組織切片經酸性分化液分化后呈紅色或粉紅色,需立即水洗終止分化,再用弱堿性溶液使蘇木素,這個過程就是返藍作用。如果沒有專用的返藍液,用溫水浸洗也能使細胞核返藍,只是所需時間略長。推薦78NB10003蘇木素返藍液。
3. 蘇木素及伊紅染色程度可以根據染色需要進行調整染色時間。
4. 蘇木素染液可重復使用多次,每次用完后需密封保存,防止有效成分揮發(fā)。當組織或細胞著色明顯偏淺或顏色異常時請更換新的染液。
5. 用于染色后脫水的無水乙醇純度需大于99.9%。如果乙醇含水,伊紅會褪色導致染色不均勻。
6. 伊紅染液(醇溶)可反復使用數次,當組織著色明顯偏淺時建議更換新的染液。
7. 操作時請穿實驗服,佩戴一次性手套。
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
78GD10081-100mL | HE染液 | 100mL | BIOHUB |
78GD10081-500mL | HE染液 | 500mL | BIOHUB |