產(chǎn)品描述一、 化學(xué)結(jié)構(gòu):二、 檢測原理:本產(chǎn)品是一種新型的對 Lipid ROS 高選擇性、高靈敏的脂質(zhì)過氧化傳感器,與其他 ROS 捕獲探針不同之處在于,具有好的親脂性可以快速入膜,隨后可以選擇性的對細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞膜中的脂質(zhì)過氧化(Lipid ROS)進(jìn)行捕獲,并在氧化后仍保持親脂性,不會離開脂質(zhì)膜,該過程同時伴隨熒光信號變化。多用于熒光顯微鏡、流式細(xì)胞分析等對 Lipid ROS 的可視化監(jiān)測。本產(chǎn)品 結(jié)構(gòu)中多不飽和丁間二烯基在 Lipid ROS 催化氧化后,其熒光發(fā)射峰從 590 nm偏移至 510 nm。實驗步驟
商品開封后,離心機(jī)輕甩;隨后加入適量 DMSO 進(jìn)行溶解,溶解度至少可達(dá) 25mg/mL。溶解后建議分裝-20℃避光保存,盡量避免反復(fù)凍融,防止吸潮。
【注】:樣品輕甩目的是為了避免痕量的探針吸附管壁損失樣本。
1) 流式細(xì)胞分析:
懸浮細(xì)胞:800 g 離心 5 min 收集細(xì)胞沉淀;隨后 PBS 洗滌細(xì)胞兩遍。
貼壁細(xì)胞:棄培養(yǎng)液,用常溫 PBS 或培養(yǎng)液輕洗細(xì)胞 2 次,隨后胰酶消化,800g 離心 5 min 收集細(xì)胞沉淀,隨后 PBS 洗滌細(xì)胞兩遍,每個樣本收集 1~5 ×105 個細(xì)胞。(注意:操作過程中輕柔吹打細(xì)胞, 消化時間不宜過長,劇烈吹打或胰酶消化過度會影響實驗結(jié)果)
本產(chǎn)品 用于脂質(zhì)過氧化檢測的推薦濃度為終濃度 5μM;配制方法:用新鮮空白培養(yǎng)液配制終濃度為 5μM 的本產(chǎn)品染色液待用,DMSO 含量≤5‰。
(注意:該步操作建議在消化細(xì)胞前準(zhǔn)備好,以免細(xì)胞消化后久置影響實驗結(jié)果)
將事先配置好的脂質(zhì)過氧化染色液加入收集的細(xì)胞沉淀中,推薦體積為 500μL,隨后置于 37℃孵箱, 染色 30min,期間 5-10min 間隔輕彈細(xì)胞使其懸浮保證染色更充分。
染色結(jié)束后,800 g 離心 5 min,棄上清,隨后用PBS 清洗細(xì)胞 2 次,加入 200μLPBS 重懸細(xì)胞用于流式分析。
接種適當(dāng)密度的細(xì)胞于 20mm 規(guī)格的蓋玻片上(也可用共聚焦小皿替代),給予實驗藥物處理適當(dāng)時間后,吸去培養(yǎng)液,用 PBS 洗滌細(xì)胞一遍加入 500 μL 配制好的脂質(zhì)過氧化染色液,于 37℃染色 30min;(配制方法參考流式分析中的染色液配制)棄培養(yǎng)液,PBS 洗滌細(xì)胞兩遍后熒光顯微鏡或激光共聚焦下進(jìn)行成像檢測。細(xì)胞在染色后應(yīng)在 1 h 之內(nèi)完成檢測。
3)檢測條件:該分子探針在還原狀態(tài)下最佳激發(fā)波長為 581 nm, 發(fā)射為 591nm;被 Lipid ROS 氧化后最佳激發(fā)波長為 500 nm,發(fā)射在 510nm。因此,在流式分析中檢測通道為 FL1-A;激光共聚焦檢測:氧化態(tài)激發(fā)波長可選488nmFITC)通道;還原態(tài)激發(fā)波長可選 561 nm(TRITC)通道。
實驗案例分析流式分析實驗范例:使用本試劑檢測 10 μM RSL3(鐵死亡經(jīng)典誘導(dǎo)劑)處理 A549 細(xì)胞 24 h 后的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化水平的流式檢測
原位成像實驗范例:
下圖為 RSL3(10 μM)處理A549 細(xì)胞 24 h 后,使用本試劑(5μM)對活細(xì)胞中脂質(zhì)過氧化水平進(jìn)行原位染色后激光共聚焦成像結(jié)果。
注意事項1. 此試劑盒僅供科研使用。2. 使用前小心離心數(shù)秒取用,需佩戴手套操作,注意避免與皮膚、眼睛和黏膜接觸。3. 本試劑盒可用檢測活細(xì)胞中 Lipid ROS 水平,用于評價細(xì)胞鐵死亡狀態(tài)。
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
78EA10007-0.5mg | 脂質(zhì)過氧化探針C11-BODIPY581/591 | 0.5mg | BIOHUB |
78EA10007-1mg | 脂質(zhì)過氧化探針C11-BODIPY581/591 | 1mg | BIOHUB |