產(chǎn)品詳情
T4 DNA聚合酶是來源于T4噬菌體的DNA聚合酶,又名T4 gp43,分子量為104kDa,在T4噬菌體DNA復(fù)制中負(fù)責(zé)先導(dǎo)鏈和滯后鏈5’→3’方向的脫氧核糖核酸合成。T4 DNA polymerase的聚合酶活性強(qiáng)于DNA 聚合酶 I,不具有 5'-3' 核酸外切酶活性。本T4 DNA polymerase(exo-)為通過點突變D219A改造,使其3'-5' 外切核酸酶活性大大降低,但保留了完整的聚合酶活性。
本公司T4 DNA polymerase 是重組表達(dá),并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。
特點
? 無鏈置換活性
? 無5’-3’外切酶活性,不能進(jìn)行切口平移
? 3’-5’外切酶活性大大地降低
? 熱失活:75°C for 20 min
濃度
5U/μl
活性定義
一個活力單位即在37℃條件下,30分鐘內(nèi)催化10 nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。
活性測定條件
1×T4 DNA polymerase (exo-)Buffer:20 mM Tris-HCl,50 mM NaCl,10 mM MgCl2,0.5mM DTT,0.1mg/ml BSA (pH 7.9 @ 25°C),37℃溫育
酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl,200 mM NaCl,10 mM MgCl2,5mM DTT,50% Glycerol,pH 7.5。
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | 78DC10062-200U | 78DC10062-1000U |
T4 DNA polymerase(exo-) | 200U | 1000U |
10×T4 DNA polymerase (exo-)Buffer | 0.5ml | 1.5ml |
0.1% BSA(1mg/ml) | 0.5ml | 1.5ml |
適用范圍
? 縫隙填充(無缺口平移活性)
? 去除3’突出單鏈或補(bǔ)平5’突出單鏈,形成平末端
? 生成無縫克隆中的5’突出端,實現(xiàn)基因和載體的互補(bǔ)配對
應(yīng)用舉例
1.補(bǔ)平5’突出單鏈,形成平末端
1)按下表配制反應(yīng)體系
反應(yīng)組分 | ul |
10× Buffer | 2 |
2mM dNTP | 2 |
底物:3’突出或5’突出DNA | 100ng-1µg |
T4 DNA polymerase (5U/µl) | 1 |
0.1%BSA | 2 |
H2O | |
總體積 | 20 |
2) 37℃×30min反應(yīng),
3)75℃×15min失活酶,
按需進(jìn)行后續(xù)實驗。
質(zhì)量控制
經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控檢測,確保該產(chǎn)品具有最高的活性和純度。
運(yùn)輸與保存
-20℃可保存2年,避免反復(fù)凍融。
注意事項
l 適用于凹陷單鏈區(qū)聚合補(bǔ)平反應(yīng)(聚合酶反應(yīng))的緩沖液包括:AM Buffer A-D、A1-D1、T4 DNA連接酶反應(yīng)緩沖液。
l 鑒于AM Buffer B2是此酶最youBuffer,當(dāng)使用不包含BSA的緩沖液時,建議補(bǔ)充BSA。
l Activity in AM Buffers:AM Buffer A: 60% ;AM Buffer B、C、D: 100%。
l 離子強(qiáng)度超過100 mM時活性將被抑制,SH基的還原劑促進(jìn)活性。
l 活性易受模板DNA高級結(jié)構(gòu)影響,T4 gene 32(T4 SSB)蛋白可以顯著提高聚合酶活性。
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
78DC10062-200U | T4 DNA聚合酶 (Exo-) | 200U | BIOHUB |
78DC10062-1000U | T4 DNA聚合酶 (Exo-) | 1000U | BIOHUB |