產(chǎn)品描述
核糖核酸酶A(Ribonuclease A,常用縮寫RNase A),來源于牛胰,一種含4個二硫鍵的單鏈多肽,分子量約為13.7 kDa(氨基酸序列)為高度專一性核酸內(nèi)切酶。作為一種核糖核酸內(nèi)切酶(endoribonuclease),特異性降解單鏈RNA上的胞嘧啶(C)或尿嘧啶(U)殘基。具體來說,切割識別的是由某核苷酸上的5’-核糖和相鄰的嘧啶類核苷酸3’-核糖上磷酸基團(tuán)形成的磷酸二酯鍵,從而使得2’, 3’-環(huán)磷酸水解為對應(yīng)的3’-核苷磷酸(比如,pG-pG-pC-pA-pG經(jīng)RNase A切割產(chǎn)生pG-pG-pCp 和A-PG)。RNase A切割單鏈RNA活性最高,推薦工作濃度為1-100 μg/mL,兼容于各種反應(yīng)體系。低鹽濃度(0-100 mM NaCl),可用來切割單鏈RNA,雙鏈RNA,以及RNA-DNA雜交形成的RNA鏈。然而,高鹽濃度(≥0.3 M),RNase A僅特異性切割單鏈RNA。
核糖核酸酶A(RNase A)最常見的應(yīng)用在于質(zhì)粒DNA或基因組DNA制備過程中去除RNA,此制備過程中DNase酶活性的存在與否是需要重視的污染之一,可采用水浴煮沸這種傳統(tǒng)方法來滅活DNase活性。另外,本品還可用于RNA酶保護(hù)分析、RNA序列分析等分子生物學(xué)實驗。
產(chǎn)品性質(zhì)
CAS號(CAS NO.) | 9001-99-4 |
分子量(Molecular Weight) | ~13.7KD |
外觀(Appearance) | 白色凍干粉末 |
來源(Source) | 牛胰腺 |
最佳PH(Optimal temperature) | 7.6(活性范圍6-10) |
最適溫度(Optimal temperature) | 60 ℃(活力范圍15-70℃) |
激活劑(Activator) | 鈉鹽、鉀鹽等 |
抑制劑(Inhibitor) | 核酸酶抑制劑 |
失活方法(Inactivation) | 加熱不會失活,建議用離心柱或者酚氯仿抽提來充分去除 |
溶解性(Solubility) | 溶于水(10 mg/mL) |
酶活力(Activity) | ≥60 Kunitz units/mg |
等電點(diǎn)(Isoelectric point) | 9.6 |
使用方法使用方法
儲存液制備
【注】:此為RNase A儲存液配制的常用方法之一,也可以根據(jù)實驗室傳統(tǒng)的方法,或者參考文獻(xiàn)資料使用其他方法制備儲存液(如直接溶于10 mM Tris-Cl, pH7.5或者Tris-NaCl溶液)。
1)將RNase A溶解在10mM 醋酸鈉(pH5.2)中,制備成終濃度10 mg/mL 的RNase A 儲存液;
2)100℃加熱15 min;
3)冷卻到室溫,加入1/10體積的1 M Tris-HCl(pH7.4),調(diào)其pH至7.4(如:5 mL 10 mg/mL的RNase 儲存液加入500 μL 1 M Tris-HCl, pH7.4);
4)分裝于-20℃凍存,可穩(wěn)定保存長達(dá)2年。
【注】:在中性條件下煮沸RNase A溶液,會有RNase沉淀形成;在更低的pH下將其煮沸,如有沉淀可以觀察到,可能由于蛋白雜質(zhì)存在造成。煮沸之后若發(fā)現(xiàn)沉淀,可通過高速離心(13,000 rpm)去除雜質(zhì),然后分裝凍存。
運(yùn)輸及保存方法冰袋運(yùn)輸。-20℃干燥保存,有效期2年。
注意事項
1)RNase A會強(qiáng)吸附在玻璃器皿上,建議溶液裝到塑料離心管內(nèi)。
2)對于同時操作完整RNA實驗的研究人員,一定要謹(jǐn)防RNase A引入干擾試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4)本產(chǎn)品僅作科研用途!
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
78DC10149-100mg | RNase A, from bovine pancreas核糖核酸酶A,來源于牛胰腺 | 100mg | BIOHUB |
78DC10149-1g | RNase A, from bovine pancreas核糖核酸酶A,來源于牛胰腺 | 1g | BIOHUB |