核糖核酸酶 H說(shuō)明書(shū)
產(chǎn)品詳情
核糖核酸酶H(RNase H)是一種核糖核酸內(nèi)切酶,它能夠特異性地水解雜交到DNA鏈上的RNA 的磷酸二酯鍵。該酶不能消化單鏈RNA、單鏈或雙鏈DNA。主要用于cDNA第二鏈合成時(shí)除去 mRNA ;以及一步法RT-PCR中去除mRNA鏈,生成cDNA單鏈,提高cDNA與引物的配對(duì)效果,改善RT-PCR效果。
本公司RNase H是重組表達(dá),并經(jīng)多步純化制備的大腸桿菌RNase H重組蛋白。
特點(diǎn)
? 不消化單鏈RNA、單鏈或雙鏈DNA
? 熱失活:65℃×20 分鐘
濃度
5U/μl
活性定義
1單位指在溫度為37℃,1× RNase H 反應(yīng)緩沖體系的條件下,20min內(nèi)能水解20 pmol熒光標(biāo)記的50 bp RNA-DNA雜交鏈成1 nmol核苷酸所需的酶量。
活性測(cè)定條件
50 mM Tris-HCl,75 mM KCl,3 mM MgCl2,10 mM DTT(pH 8.3 @ 25℃),37℃溫育。
酶貯存緩沖液
10mM Tris-HCl,50 mM KCl,1 mM DTT ,0.1 mM EDTA ,200 µg/ml BSA,50% Glycerol ,pH 7.4 @ 25°C。
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | 78DC10109-250U | 78DC10109-1250U |
RNase H | 250U | 1250U |
10× RNase H Buffer | 0.5ml | 1.5ml |
適用范圍
? 除去雜交到poly(dT)上的mRNA poly(A)
? 在cDNA第二鏈合成時(shí)除去 mRNA
應(yīng)用舉例
1、RT-PCR去除RNA/DNA雜合雙鏈的RNA鏈
1)按下表配制反應(yīng)體系
反應(yīng)組分 | ul |
10× PCR Buffer | 5 |
Primer-F(10uM) | 2 |
Primer-R(10uM) | 2 |
dNTP(2mM) | 5 |
RT反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 | 100-200ng |
RNase H | 1 |
Taq DNA聚合酶 | 2.5U |
H2O | Variable |
總體積 | 50 |
2) 35°C反應(yīng)5-10min;
3) PCR反應(yīng)。
4) 瓊脂糖電泳檢測(cè)DNA,或進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)
2、cDNA第二鏈合成時(shí)除去 mRNA
1)按下表配制反應(yīng)體系
反應(yīng)組分 | ul |
10× Buffer | 5 |
Primer-F(10uM) | 2 |
dNTP(2mM) | 5 |
RT反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 | 100-200ng |
RNase H | 1 |
Ec DNA聚合酶大片段 | 1 |
H2O | Variable |
總體積 | 50 |
2) 35°C反應(yīng)15-30min;
3) 瓊脂糖電泳檢測(cè)DNA,或進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)
運(yùn)輸與保存
-20℃保存
注意事項(xiàng)
l 本RNase H為常溫酶,在16-42℃范圍內(nèi)具有高活性,最佳反應(yīng)溫度為32-37℃。
l 本酶不耐高溫,因此反應(yīng)溫度不能高于42℃。
警告: 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用,臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定,不可用于醫(yī)療臨床診斷。
質(zhì)量控制
相關(guān)測(cè)試表明無(wú)外源內(nèi)切、外切脫氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法檢測(cè)無(wú)宿主殘余DNA。
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
78DC10109-250U | 核糖核酸酶 H | 250U | BIOHUB |
78DC10109-1250U | 核糖核酸酶 H | 1250U | BIOHUB |
郵箱:xs1@78bio.com
地址:上海市浦東新區(qū)川沙新鎮(zhèn)6619號(hào)