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核糖核酸酶 H說(shuō)明書(shū)

更新時(shí)間:2023-10-24      點(diǎn)擊次數(shù):184

核糖核酸酶 H說(shuō)明書(shū)

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產(chǎn)品詳情

核糖核酸酶HRNase H)是一種核糖核酸內(nèi)切酶,它能夠特異性地水解雜交到DNA鏈上的RNA 的磷酸二酯鍵。該酶不能消化單鏈RNA、單鏈或雙鏈DNA。主要用于cDNA第二鏈合成時(shí)除去 mRNA ;以及一步法RT-PCR中去除mRNA鏈,生成cDNA單鏈,提高cDNA與引物的配對(duì)效果,改善RT-PCR效果。

本公司RNase H是重組表達(dá),并經(jīng)多步純化制備大腸桿菌RNase H重組蛋白。

特點(diǎn)

? 不消化單鏈RNA、單鏈或雙鏈DNA

? 熱失活:65℃×20 分鐘

濃度

5U/μl

活性定義

1單位指在溫度為37℃,1× RNase H 反應(yīng)緩沖體系的條件下,20min內(nèi)能水解20 pmol熒光標(biāo)記的50 bp RNA-DNA雜交鏈成1 nmol核苷酸所需的酶量。

活性測(cè)定條件

50 mM Tris-HCl75 mM KCl,3 mM MgCl2,10 mM DTT(pH 8.3 @ 25℃),37℃溫育。

酶貯存緩沖液

10mM Tris-HCl,50 mM KCl1 mM DTT ,0.1 mM EDTA ,200 µg/ml BSA,50% Glycerol ,pH 7.4 @ 25°C。

產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成

Component

78DC10109-250U

78DC10109-1250U

RNase H

250U

1250U

10× RNase H Buffer

0.5ml

1.5ml


適用范圍

? 除去雜交到poly(dT)上的mRNA poly(A)

? cDNA第二鏈合成時(shí)除去 mRNA

應(yīng)用舉例

1RT-PCR去除RNA/DNA雜合雙鏈的RNA

1按下表配制反應(yīng)體系


反應(yīng)組分

ul

10× PCR Buffer

5

Primer-F10uM

2

Primer-R10uM

2

dNTP2mM

5

RT反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物  

100-200ng

RNase H

1

Taq DNA聚合酶

2.5U

H2O

Variable

總體積

50

2) 35°C反應(yīng)5-10min;

3) PCR反應(yīng)。

4) 瓊脂糖電泳檢測(cè)DNA,或進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)


2、cDNA第二鏈合成時(shí)除去 mRNA

1按下表配制反應(yīng)體系

反應(yīng)組分

ul

10× Buffer

5

Primer-F10uM

2

dNTP2mM

5

RT反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物  

100-200ng

RNase H

1

Ec DNA聚合酶大片段

1

H2O

Variable

總體積

50

2) 35°C反應(yīng)15-30min

3) 瓊脂糖電泳檢測(cè)DNA,或進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)

運(yùn)輸與保存

-20℃保存

注意事項(xiàng)

l RNase H為常溫酶,在16-42℃范圍內(nèi)具有高活性,最佳反應(yīng)溫度為32-37℃。

l 本酶不耐高溫,因此反應(yīng)溫度不能高于42℃。

警告: 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用,臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定,不可用于醫(yī)療臨床診斷。

質(zhì)量控制

相關(guān)測(cè)試表明無(wú)外源內(nèi)切、外切脫氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法檢測(cè)無(wú)宿主殘余DNA



貨號(hào)品名規(guī)格品牌
78DC10109-250U核糖核酸酶 H250U

BIOHUB

78DC10109-1250U核糖核酸酶 H1250U

BIOHUB







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