mRNA Cap 2′-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(50U/μL)說(shuō)明書
產(chǎn)品描述
mRNA Cap2氧甲基轉(zhuǎn)移酶(mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase)是一種來(lái)自于牛痘病毒的重組蛋白。該酶可以在RNA的5′末端緊挨帽結(jié)構(gòu)的第一個(gè)核苷酸的2′-O位置處添加一個(gè)甲基基團(tuán)。該酶利用SAM作為甲基供體來(lái)甲基化加帽RNA,從而形成Cap1結(jié)構(gòu)。Cap1結(jié)構(gòu)能增強(qiáng)mRNA的翻譯效率,因此可有助于改善mRNA轉(zhuǎn)染和顯微注射實(shí)驗(yàn)中的表達(dá)。該酶需要有m7GpppN即7-甲基鳥苷帽結(jié)構(gòu)的RNA作為底物。
產(chǎn)品性質(zhì)來(lái)源:攜帶牛痘病毒2'-O-甲基轉(zhuǎn)移酶基因的E. coli分子量:82 kDa純度:≥95%比活:50 U/μL比活單位定義:在 37℃下1 h內(nèi)將10 pmol 80 nt 的帶帽RNA轉(zhuǎn)錄物甲基化所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位存儲(chǔ)緩沖液:20 mM Tris-HCl,100 mM NaCl,1 mM DTT,0.1 mM EDTA,0.1% TritonX-100,50%甘油,pH 8.0 產(chǎn)品組分
組分 | 產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 | ||
78MRNA-1106A | 78MRNA-1106B | 78MRNA-1106C | |
mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase (50 U/μl) | 50 μl | 200 μl | 1 ml |
10x Capping Reaction Buffer | 150 μl | 500 μl | 1.25x2 ml |
SAM (32 mM) | 50 μl | 200 μl | 1 ml |
RNase free water | 1 ml | 1 ml | 1mlx3 |
產(chǎn)品應(yīng)用【Uncapped RNA 一步加帽法 】適用于10 μg以內(nèi) uncapped RNA(≥100 nt)的加帽反應(yīng),反應(yīng)體系20 μL,且可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要放大。1. 取10 μg RNA,用RNase free water將適量RNA稀釋至14 μL;2. 將RNA置于65℃加熱5 min,結(jié)束后冰上放置5 min;3. 按照右側(cè)表格依次加入各組分;4. 37℃反應(yīng)60 min;5. RNA加帽完成,可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
組分 | 體積 |
Denatured uncapped RNA | 14 ul |
10x Capping Buffer | 2 ul |
GTP (10 mM) | 1 ul |
SAM (4 mM) | 1 ul |
Vaccinia Capping Enzyme (10 U/μL) | 1 ul |
mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase (50 U/μL) | 1 ul |
Total volume | 20 ul |
【 Cap 0-RNA 的甲基化反應(yīng) 】適用于10 μg以內(nèi) Cap 0-RNA(≥100 nt)的甲基化反應(yīng),反應(yīng)體系20 μL,且可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要放大。1. 用RNase Free Water將適量RNA稀釋至15 μL;2. 將RNA置于65℃加熱5 min,結(jié)束后冰上放置5 min;3. 按照右側(cè)表格依次加入各組分;4. 37℃孵育60 min;5. RNA加帽完成,可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
組分 | 體積 |
Denatured capped RNA | 15 ul |
10x Capping Buffer | 2 ul |
GTP (10 mM) | 1 ul |
SAM (4 mM) | 1 ul |
mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase (50 U/μL) | 1 ul |
Total volume | 20 uL |
注意事項(xiàng): (1)用于加帽反應(yīng)的RNA在使用前應(yīng)進(jìn)行純化并溶解于RNase free water 。溶液中不能含有EDTA和鹽。(2)加帽酶反應(yīng)前加熱RNA可以去除轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物5′的二級(jí)結(jié)構(gòu)。如果轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的5′端結(jié)構(gòu)復(fù)雜,可將加熱時(shí)間延長(zhǎng)至10 min。(3)如果轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的5′端結(jié)構(gòu)復(fù)雜,為提高加帽效率可將反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)至120 min。(4)SAM在室溫下會(huì)逐漸降解,SAM降解會(huì)導(dǎo)致N 7 甲基化效率降低,會(huì)進(jìn)一步導(dǎo)致加帽失敗,因此需始終放置在冰上。此外,也可以通過(guò)體系優(yōu)化適當(dāng)提高用量以保證加帽反應(yīng)順利進(jìn)行。 其他用途可參考上述用途或相關(guān)文獻(xiàn)資料進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 運(yùn)輸和保存方法
運(yùn)輸條件:藍(lán)冰/干冰運(yùn)輸
保存溫度:-20℃以下保存
避免反復(fù)凍融或頻繁暴露于溫度變化中,shou次使用時(shí)建議進(jìn)行分裝。
產(chǎn)品效期:12個(gè)月
注意事項(xiàng)
1. 使用時(shí)宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上,使用完畢后宜立即放置于-20℃保存;
2. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作;
3. 產(chǎn)品僅供研究使用
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
78MRNA-1106A | mRNA Cap 2′-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(50U/μL) | 2500 U | BIOHUB |
78MRNA-1106B | mRNA Cap 2′-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(50U/μL) | 10000 U | BIOHUB |
78MRNA-1106C | mRNA Cap 2′-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(50U/μL) | 50000 U | BIOHUB |
郵箱:xs1@78bio.com
地址:上海市浦東新區(qū)川沙新鎮(zhèn)6619號(hào)