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大腸桿菌HMS174 (DE3)說明書

更新時(shí)間:2023-10-24      點(diǎn)擊次數(shù):223

大腸桿菌HMS174 (DE3)說明書

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產(chǎn)品描述
本品為大腸桿菌HMS174 (DE3)(基因型:K-12,F-,λDE3[lacI,lacUV5-T7gene1,ind1,sam7,nin5],recA1,hsdR19,IN(rrnD-rrnE)1,rph-1,rpoB331(rifR))制作的高效感受態(tài),該菌株源于大腸桿菌K12菌株,含有RecA突變。對(duì)于能夠?qū)е?/span>DE3噬菌體損失的特定基因,該菌株能夠穩(wěn)定表達(dá)這種基因。DE3是溶源性的λDE3,帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝,可在IPTG誘導(dǎo)下表達(dá)T7 RNA聚合酶。HMS174 (DE3)具有完整的乳糖代謝途徑,故在誘導(dǎo)蛋白表達(dá)時(shí),可以用乳糖同時(shí)作為唯yi碳源和誘導(dǎo)劑,因此不需要IPTG作為誘導(dǎo)劑,成本比BL21(DE3)以葡萄糖做碳源,以ITPG做誘導(dǎo)劑的表達(dá)模式低,適合工業(yè)級(jí)大規(guī)模表達(dá)外源蛋白。該菌株同時(shí)具有利福平抗性。HMS174 (DE3)是染色體上攜帶lacUV-T7 RNA聚合酶基因的專門用于蛋白表達(dá)的K-12菌株。該菌株適用于pET系列載體,及其他T7啟動(dòng)子系列載體,與BLR(DE3)類似。經(jīng)pUC19 質(zhì)粒(2686bp,AmpR)檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>1×107 cfu/μg DNA。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞解凍后應(yīng)立即使用,不可在冰中放置過長(zhǎng)時(shí)間。
2. 不能用移液器抽吸感受態(tài)細(xì)胞,用手指輕彈混勻即可。
3. 質(zhì)粒使用量<50 ng即可獲得很好的轉(zhuǎn)化。
使用方法
使用方法
1. 從-80 ℃冰箱中取出感受態(tài)細(xì)胞,放入冰中5 min,加入目的質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物,輕彈使混合均勻,并在冰中孵育30min;
2. 放42℃水浴鍋中熱激90 s,立即插入冰中靜置2-3 min;
3. 添加900 μL LB液體培養(yǎng)基,37℃搖床220 rpm培養(yǎng)60 min;
4. 離心(質(zhì)粒轉(zhuǎn)化無需離心,吸取100μL菌液涂布即可),倒掉上清,余下菌液均勻涂布抗性平板,37℃培養(yǎng)箱放置過夜。



貨號(hào)品名規(guī)格品牌
78BDC10020-10×100uLHMS174 (DE3)10×100uLBIOHUB
78BDC10020-50×100uLHMS174 (DE3)50×100uLBIOHUB



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