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支原體檢測試劑盒 說明書

更新時間:2024-08-16      點擊次數(shù):178

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支原體污染會對細(xì)胞各個方面都造成不良影響,已經(jīng)成為細(xì)胞培養(yǎng)中高度重視的問題,因此,定期進(jìn)行支原體污染檢測是十分必要的。本支原體檢測試劑盒是采用PCR方法,特異性的檢測各種培養(yǎng)細(xì)胞生物材料(如細(xì)胞培養(yǎng)物、實驗動物分泌物、動物血清等)中支原體的污染。試劑盒使用的混合引物是針對支原體16s rRNA序列的保守區(qū)域設(shè)計的特異性引物,可直接使用細(xì)胞培養(yǎng)液作為PCR模板,特異性擴(kuò)增支原體DNA,搭配配套的Mycoplasma PCR Mix(2×)一小時內(nèi)即可完成,本試劑盒檢測靈敏度高,可檢測低至20個拷貝的支原體。



組成

78EA10015-50T

Mycoplasma PCR Mix(2×)

1 mL

Mycoplasma Primer Mix

100 μL

Positive Control

50 μL

Mycoplasma Free Water

1 mL










使用方法

1. 樣品準(zhǔn)備:取適量待檢細(xì)胞培養(yǎng)上清于潔凈的PCR管中,利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板。血清樣本可利用無支原體去離子水水稀釋后,取適量樣本于潔凈的PCR管中,利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板;

2. PCR體系配制:每次實驗需設(shè)置陰性對照(將1 μL待檢樣品換成等量的無支原體去離子水)與陽性對照(在1 μL待檢樣品中加入0.5 μL Positive Control后一起作為Template),實驗時戴一次性口罩與手套,謹(jǐn)慎操作,防止操作不當(dāng)引入外源支原體污染;

3. PCR程序設(shè)置

步驟

溫度

時間

周期

Initial Denaturation

98℃

2 min

1

Denaturation

98℃

20 s

30

Annealing

56℃

25 s

Extension

72℃

10 s

Final extension

72℃

5 min

1

Hold

4-16℃

Forever













4. 凝膠電泳:取10 μL PCR產(chǎn)物,使用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測;

 

5. 結(jié)果分析:每次實驗通過與陰性對照、陽性對照檢測結(jié)果比較確認(rèn)樣品支原體污染情況,陽性條帶大小500 bp左右。如陰性對照檢測結(jié)果中有條帶很有可能是P


CR體系中出現(xiàn)污染,建議重新實驗確認(rèn)結(jié)果。如有必要,也可對PCR產(chǎn)物進(jìn)行常規(guī)測序,以確定具體的支原體種屬。



貨號品名規(guī)格品牌
78EA10015-50TPCR法支原體檢測試劑盒50TBiohub


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