ECL Plus®超敏發(fā)光液用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶HRP的抗體及其關聯(lián)的抗原。由于采用了BIOHUB核心技術基于“熒光震蕩"機理設計的發(fā)光底物系統(tǒng)??赏℉RP實現(xiàn)低皮克級(以HRP濃度為準)的免疫印跡檢測,其靈敏度,發(fā)光時間和背景均明顯優(yōu)秀。
1. 可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1:2000~1:10000),極其節(jié)省抗體。
2. 簡單易用— 可替代其它公司的ECL發(fā)光底物,操作步驟無需進行特別優(yōu)化
3. 靈敏度更高— 可檢測低皮克級的蛋白
4. 信號持續(xù)時間更長— 光信號持續(xù)時間長達5小時
5. 更多成像方法— 適用于X射線膠片、CCD或激光成像儀
6. 價格更經(jīng)濟— 相比其他品牌的類似產(chǎn)品,不僅具有高品質和高性能,同時價格也更低
用于HRP標記抗體的Western Blot和HRP標記探針的核酸雜交。
安全性:無特殊毒性,按普通化學品處理。
使用方法
1. 執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉膜和Western Blot步驟。注意用HRP標記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。
注:優(yōu)化抗原和抗體的濃度。必須使用建議的抗體稀釋度,以保證陽性結果。
1) 將一抗?jié)舛认♂尩?.05~1ug/ml
2) 將二抗?jié)舛认♂尩?.005~0.04ug/mL
3) 將兩種底物組份按1:1比例混合,制備底物工作液。
注:暴漏于日光或任何其他強光可能損害工作液,為獲得最佳結果,將此工作液保存在琥珀色瓶中,并避免長期暴漏于任何強光。短時間暴漏于實驗室常規(guī)照明不會損害該工作液。
4) 將印跡膜在ECL底物工作液中孵育5分鐘。
5) 吸出多余試劑。用清潔的塑料膜蓋住該印跡膜。
6) 使印跡膜在X光膠片上曝光。
2. Western Blot最后一次洗膜的同時新鮮配制發(fā)光工作液:分別取等體積的溶液A和B,放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液,室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低。
3. 用鑷子取出膜,搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜干燥。將膜浸入發(fā)光工作液(0.125mL發(fā)光工作液/cm2膜)中,與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3分鐘,準備立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度,有時還會導致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質是酶促反應,使用過少的發(fā)光工作液不利反應進行,也會導致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。
4. 用鑷子夾起膜,搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。
5. 打開X光膠片暗盒,在暗盒內表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將Western Blot膜貼在保鮮膜上,將保鮮膜折起來包裹Western Blot膜,去除氣泡和皺褶,可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋Western Blot膜的保鮮膜固定在暗盒內,蛋白帶面向上。
6. 暗房內壓X光膠片,分別曝光不同的時間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。
注意事項
(1)步驟1~5可在日光燈下操作;但發(fā)光液曝露于強光下時間過久靈敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
(2)長時間曝光或蛋白過量,將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關系。曝光不足則條帶模糊。
(3)發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見,低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時間。肉眼不可見的熒光實際上可持續(xù)數(shù)小時并使X光膠片感光,因而弱帶可曝光1-10小時。如果曝光后條帶不佳,可用洗膜緩沖液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL發(fā)光和曝光。
(4)由于超敏發(fā)光液極其靈敏,強烈推薦大多數(shù)進口抗體起始濃度為一抗1:1000~1:4000,二抗1:2000~1:5000??贵w濃度過高將造成高背景或沒有條帶,導致失敗。
(5)某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光,應選擇高質量保鮮膜。
(6)使用肉眼可見的預染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。
(7)NaN3能抑制HRP活性,回收第二抗體應避免使用NaN3,如必需使用勿超過0.01%。
(8) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
(9) 本產(chǎn)品主要用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
78CI10001 | ECL Plus 高敏發(fā)光液 | 100ml、500ml | Biohub |