血清使用常見(jiàn)問(wèn)題和應(yīng)對(duì)方法
1、血清保存的最好方法?
血清最好保存在-20℃保存。若一次使用不完一瓶,建議無(wú)菌分裝于適當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)冷凍備用。
2、如何解凍血清,才能保證其質(zhì)量不會(huì)受損?
我們建議將血清從冷凍箱取出后,置于2℃~8℃冰箱中解凍,然后在室溫下全融,解凍過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻,過(guò)大的溫差變化(-20℃~-37℃,溫差為57℃),極其容易造成血清析出沉淀。
注意:從低溫冰箱取出血清直接置于56℃水浴中更是極其殘忍的做法,是對(duì)血清的不負(fù)責(zé)任,對(duì)科學(xué)規(guī)則的無(wú)情踐踏!
3、為什么血清在解凍后會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀?應(yīng)該怎樣處理?
血清中絮狀沉淀產(chǎn)生的原因有很多,其中zui普遍的還是由于血清中脂蛋白的變性所致,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會(huì)存在于血清中,這也是造成沉淀的主要原因,但這些絮狀沉淀并不影響血清本身的質(zhì)量。欲去除沉淀,可采取自然沉降法或者將血清分裝于無(wú)菌離心管中,以400-600G離心5min,上清液即可加入培養(yǎng)基內(nèi)一起培養(yǎng)。我們不建議用過(guò)濾的方法去除絮狀沉淀,因?yàn)槌恋頃?huì)阻塞濾膜,造成過(guò)濾困難或無(wú)法過(guò)濾,另一方面,過(guò)濾血清這種行為可能會(huì)導(dǎo)致血清中部分營(yíng)養(yǎng)成分的流失。
4、為什么要熱滅活血清?有必要熱滅活嗎?
加熱可以滅活血清中的補(bǔ)體系統(tǒng),使補(bǔ)體去活化。通常未滅活的補(bǔ)體能夠刺激平滑肌收縮、肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放、激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,同時(shí)還能夠參與溶解細(xì)胞的過(guò)程。
諸多研究表明大多數(shù)細(xì)胞的培養(yǎng)無(wú)須進(jìn)行血清的熱滅活;實(shí)驗(yàn)研究顯示,經(jīng)正確熱滅活處理的血清,對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)或wan全沒(méi)有促進(jìn)作用,而通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率降低。并且熱處理過(guò)的血清,沉淀物明顯增多,有會(huì)使研究者誤以為是微生物的分裂增殖,因此,我們建議,若非必須,可以不進(jìn)行熱處理。而在免疫學(xué)研究和ES細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中,推薦使用熱滅活血清。
5、如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
建議您在血清使用的過(guò)程中,采用正確的解凍方法(冷凍→4℃→室溫),若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如冷凍→37℃)非常容易產(chǎn)生沉淀物。溫度過(guò)高、時(shí)間過(guò)久、搖晃不均勻等,都會(huì)造成沉淀增多,我們建議如非必要無(wú)須對(duì)血清進(jìn)行滅活;若必須熱滅活,應(yīng)嚴(yán)格遵守56℃,30min的原則,并隨時(shí)搖晃均勻。
目前實(shí)驗(yàn)室常用品牌和型號(hào)
類(lèi)型 | 代表產(chǎn)品 | 特點(diǎn) |
特級(jí)類(lèi)胎牛血清 (zui高級(jí)別的,專(zhuān)用于干細(xì)胞的胎牛血清) | Hyclone SH30070 | 北美血源 世界上唯yi經(jīng)過(guò)40納米過(guò)濾的頂級(jí)胎牛血清,內(nèi)毒素含量小于10EU/ml,血紅蛋白含量小于10mg/dl |
Gibco 16000-044 | 北美血源100nm過(guò)濾3次,內(nèi)毒素和血紅蛋白含量都可以與Hyclone的SH30070.03相媲美 | |
QFED10002-500ml | 澳洲血源 ,質(zhì)量控制嚴(yán)格,不需要進(jìn)行不同批次測(cè)試,無(wú)病毒,無(wú)支原體,安全性高,內(nèi)毒素低于1。 | |
優(yōu)級(jí)類(lèi)胎牛血清 | Hyclone SH30396 | 加拿大血源,經(jīng)過(guò)3次100nm過(guò)濾,內(nèi)毒素含量小于25EU/ml,血紅蛋白含量小于25mg/dl,應(yīng)用細(xì)胞非常廣泛 |
Gibco 10099-141 | 澳大利亞,一級(jí)別的血清,也能用于干細(xì)胞培養(yǎng),批間差異小,質(zhì)量更穩(wěn)定,內(nèi)毒素含量更低,無(wú)病毒,無(wú)支原體 | |
QFED10001-500ml | 南美頂級(jí)胎牛血清,適用于絕大多數(shù)種類(lèi)的細(xì)胞培養(yǎng),已通過(guò)300多種細(xì)胞株和上百種原代細(xì)胞的驗(yàn)證,細(xì)胞生長(zhǎng)速度快,狀態(tài)良好。 | |
普通進(jìn)口胎牛血清 | Hyclone SV30087 | 南美血源,國(guó)內(nèi)(蘭州)過(guò)濾并測(cè)試檢驗(yàn),經(jīng)三次100納米過(guò)濾,內(nèi)毒素含量小于等于10EU/ml,血紅蛋白含量小于等于20mg/d,廣泛用于各種腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng) |
SeraPro S601P | 南美標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,質(zhì)量嚴(yán)格控制,無(wú)病毒,無(wú)支原體,具有較高的安全性 | |
國(guó)產(chǎn)的各種系列胎牛血清 | 國(guó)產(chǎn)的胎牛血清不是嚴(yán)格意義的胎牛血清。不過(guò)也很多實(shí)驗(yàn)室使用 | |
其他血清(新生牛血清,小牛血清) | 大多是用于封閉液、保護(hù)液、緩沖液等等用途的 |
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