血清的存在會(huì)影響脂質(zhì)體的形成,建議配制核酸轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物時(shí)采用無血清培養(yǎng)基(一般推薦MEM 培養(yǎng)基)。
轉(zhuǎn)染試劑能否凍存?
不能。本試劑一定要4 ℃保存,要注意避免反復(fù)多次長時(shí)間開蓋,長時(shí)間開蓋會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)體氧化而影響轉(zhuǎn)染效率。
使用脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑需要注意什么?
1)細(xì)胞鋪板密度較高,以90%-95%為佳;
2)使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率;
3)制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑;
4)轉(zhuǎn)染的時(shí)候培養(yǎng)基中不能添加抗生素;
5)試劑應(yīng)該在4度保存,要注意避免多次反復(fù)長時(shí)間開蓋;
6)初次使用應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和陽離子脂質(zhì)體試劑量以得到最大的轉(zhuǎn)染效率。DNA 和轉(zhuǎn)染試劑的比例,通常推薦是1:2-1:3。
不需要。脂質(zhì)體復(fù)合物可以穩(wěn)定存在6個(gè)小時(shí)。如果在進(jìn)行轉(zhuǎn)染前沒有進(jìn)行細(xì)胞換液,為了保證細(xì)胞正常生長所需的營養(yǎng),需要在4~6小時(shí)后換用新的培養(yǎng)基。但如果轉(zhuǎn)染之前已進(jìn)行過換液則在脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染后不需要進(jìn)行再次換液。
若想提高轉(zhuǎn)染效率,應(yīng)該注意什么?
1)轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的密度,90%-95%。
2)轉(zhuǎn)染時(shí),核酸和脂質(zhì)體稀釋液要用MEM無血清培養(yǎng)基。
3)轉(zhuǎn)染后4-6h可選擇換液。
可否進(jìn)行DNA和siRNA的共轉(zhuǎn)染?效果如何?
DNA和siRNA的共轉(zhuǎn)染時(shí)候,siRNA轉(zhuǎn)染效率差。
轉(zhuǎn)染試劑可否進(jìn)行慢病毒包裝的轉(zhuǎn)染呢?
慢病毒包裝是可以的,但是在進(jìn)行慢病毒包裝的效率不一定和轉(zhuǎn)染的效率有關(guān),同時(shí)還跟包裝質(zhì)粒的選擇和質(zhì)粒間的比例有關(guān)系。
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