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簡要描述:BIOHUB 線性聚乙烯亞胺PEI MW25000 轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉(zhuǎn)染效果,已廣泛應(yīng)用于AAV,LV和重組蛋白等工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高陽離子電荷密度的有機(jī)大分子,每相隔兩個(gè)碳原子,即每第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿"體(proton sponge)
產(chǎn)品分類
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品牌 | BIOHUB | 供貨周期 | 一個(gè)月 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
基本信息CAS:9002-98-6
分子式:(CH2CH2NH)n
分子量:25,000
熔點(diǎn):73-75℃
溶解性:溶于熱水,低pH值的冷水,甲醇和乙醇;
不溶于:苯、、yi醚、丙酮
形式:白色固體
生物毒性:未知
安全防護(hù):手套及口罩
存儲(chǔ):PEI 內(nèi)含自由氨基,建議開封后 4℃干燥保存,減緩氧化過程。
效期:3年
運(yùn)輸:常溫
特點(diǎn)大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)反饋,細(xì)胞通用性好,有非常好的轉(zhuǎn)染效果,尤其對(duì)293,CHO細(xì)胞系有特別顯著的轉(zhuǎn)染效果。
配置方法
轉(zhuǎn)染操作流程:(貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法)
1. 接種細(xì)胞: 轉(zhuǎn)染前一天,用膠原酶(BIOHUB Cat#78CL10002)消化細(xì) 胞并計(jì)數(shù)。調(diào)整細(xì)胞濃度,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,每個(gè)孔置 入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到 70~80%。
2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物: DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升 至室溫。依據(jù)表 1 所示,用 Opti-MEM ITM或其他適合的無蛋白培 養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線 性 PEI 轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批 DNA 比例可 能會(huì)稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管,一邊將稀釋的線性 PEI 轉(zhuǎn)染 試劑滴加至試管中(注意:請(qǐng)勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI 復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí),請(qǐng)用圓底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。
3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞: 直接向每個(gè)孔中加入 DNA-PEI 復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在 無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴 DNA-PEI 復(fù)合 物。轉(zhuǎn)染 3 h 后,添加½體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。
4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果: 在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染 后最快 7 h 即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。
5. 轉(zhuǎn)染 24 h 后,將細(xì)胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中(將細(xì)胞稀釋 10 倍 以上),在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆,在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。
轉(zhuǎn)染操作流程:(懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法)
1. 轉(zhuǎn)染前準(zhǔn)備:懸浮細(xì)胞傳代接種于適量含懸浮細(xì)胞生長培養(yǎng)基中,合適條件下培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)瓶大小調(diào)整細(xì)胞密度(例100mL培養(yǎng)瓶,1X10 6 cells/mL),然后旋緊瓶口放入搖床繼續(xù)培養(yǎng),2~4小時(shí)后可以進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物:DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無血清培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請(qǐng)勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí),請(qǐng)用圓底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。
3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞:將PEI-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物逐滴加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,搖勻后旋緊瓶口放回?fù)u床合適培養(yǎng)條件下培養(yǎng)至可以分析檢測。
4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果:轉(zhuǎn)染后一般24-72h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。 請(qǐng)自行確定適合檢測時(shí)間。
5. 如果要獲得更多的蛋白產(chǎn)量,有文獻(xiàn)表明轉(zhuǎn)染后24小時(shí),可以適當(dāng)稀釋細(xì)胞,稀釋比例參考范圍(1:1—1:5)之間,可以增加蛋白產(chǎn)量,稀釋效應(yīng)與最佳稀釋比率應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。
產(chǎn)品背景
BIOHUB 生產(chǎn)的78Bio PEI是一種優(yōu)化的線性陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑,分子量分別為 25000 和 40000,78BioPEI40000 相比 25000 轉(zhuǎn)染效率高,但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表達(dá)系統(tǒng)中,相比于市面上的脂質(zhì)體 78BioPEI 都表現(xiàn)出高的蛋白表達(dá)量(無 論是 96 孔板還是 100L 的細(xì)胞反應(yīng)器),以及更小的細(xì)胞毒性、更高的轉(zhuǎn)染效和更高的可 重復(fù)性,并且十分經(jīng)濟(jì)的高性價(jià)比轉(zhuǎn)染試劑。產(chǎn)品具有以下特點(diǎn):
1.轉(zhuǎn)染效率高,細(xì)胞毒性低; 蛋白表達(dá)量高;
2.節(jié)約成本:BIOHUB 78 PEI轉(zhuǎn)染試劑 ,進(jìn)口品質(zhì),親民價(jià)格,至少能夠降 40% 的轉(zhuǎn)染試劑總成本;
3.適用于 HEK293 等真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染;
4.適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染;
5.適用于有血清和無血清的轉(zhuǎn)染條件;
6. 無機(jī)試劑,無動(dòng)物源成分;
7. 產(chǎn)品穩(wěn)定,質(zhì)控嚴(yán)格;
8. 工藝流程適用范圍廣,容易優(yōu)化 適合小規(guī)模培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶到大規(guī)模的生物反應(yīng)器。
注意事項(xiàng)
1. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2. 本產(chǎn)品主要用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
3.加熱或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。當(dāng)然酸可能不用加那么多,詳細(xì)用量可試加一點(diǎn) ,攪拌看看,足夠溶解就行,不一定需要加到 pH 那么低。
4.一定要溶解充分,溶解不充分會(huì)影響后續(xù)的轉(zhuǎn)染效率.
5.冷凍后可能會(huì)影響其后續(xù)轉(zhuǎn)染效果。
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