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簡要描述:本產(chǎn)品是一種新型的對 Lipid ROS 高選擇性、高靈敏的脂質(zhì)過氧化探針,與其他 ROS 捕獲探針不同之處在于,具有好的親脂性可以快速入膜,隨后可以選擇性的對細胞內(nèi)和細胞膜中的脂質(zhì)過氧化(Lipid ROS)進行捕獲,并在氧化后仍保持親脂性,不會離開脂質(zhì)膜,該過程同時伴隨熒光信號變化。
產(chǎn)品分類
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品牌 | BIOHUB | 分子量 | 504 |
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貨號 | 78EA10007 | 供貨周期 | 一周 |
應用領(lǐng)域 | 化工 |
產(chǎn)品描述
一、 化學結(jié)構(gòu):
二、 檢測原理:
本產(chǎn)品是一種新型的對 Lipid ROS 高選擇性、高靈敏的脂質(zhì)過氧化探針,與其他 ROS 捕獲探針不同之處在于,具有好的親脂性可以快速入膜,隨后可以選擇性的對細胞內(nèi)和細胞膜中的脂質(zhì)過氧化(Lipid ROS)進行捕獲,并在氧化后仍保持親脂性,不會離開脂質(zhì)膜,該過程同時伴隨熒光信號變化。多用于熒光顯微鏡、流式細胞分析等對 Lipid ROS 的可視化監(jiān)測。本產(chǎn)品 結(jié)構(gòu)中多不飽和丁間二烯基在 Lipid ROS 催化氧化后,其熒光發(fā)射峰從 590 nm偏移至 510 nm。
實驗步驟
商品開封后,離心機輕甩;隨后加入適量 DMSO 進行溶解,溶解度至少可達 25mg/mL。溶解后建議分裝-20℃避光保存,盡量避免反復凍融,防止吸潮。
【注】:樣品輕甩目的是為了避免痕量的探針吸附管壁損失樣本。
1) 流式細胞分析:
懸浮細胞:800 g 離心 5 min 收集細胞沉淀;隨后 PBS 洗滌細胞兩遍。
貼壁細胞:棄培養(yǎng)液,用常溫 PBS 或培養(yǎng)液輕洗細胞 2 次,隨后消化,800g 離心 5 min 收集細胞沉淀,隨后 PBS 洗滌細胞兩遍,每個樣本收集 1~5 ×105 個細胞。(注意:操作過程中輕柔吹打細胞, 消化時間不宜過長,劇烈吹打或消化過度會影響實驗結(jié)果)
本產(chǎn)品 用于脂質(zhì)過氧化檢測的推薦濃度為終濃度 5μM;配制方法:用新鮮空白培養(yǎng)液配制終濃度為 5μM 的本產(chǎn)品染色液待用,DMSO 含量≤5‰。
(注意:該步操作建議在消化細胞前準備好,以免細胞消化后久置影響實驗結(jié)果)
將事先配置好的脂質(zhì)過氧化染色液加入收集的細胞沉淀中,推薦體積為 500μL,隨后置于 37℃孵箱, 染色 30min,期間 5-10min 間隔輕彈細胞使其懸浮保證染色更充分。
染色結(jié)束后,800 g 離心 5 min,棄上清,隨后用PBS 清洗細胞 2 次,加入 200μLPBS 重懸細胞用于流式分析。
接種適當密度的細胞于 20mm 規(guī)格的蓋玻片上(也可用共聚焦小皿替代),給予實驗藥物處理適當時間后,吸去培養(yǎng)液,用 PBS 洗滌細胞一遍加入 500 μL 配制好的脂質(zhì)過氧化染色液,于 37℃染色 30min;(配制方法參考流式分析中的染色液配制)棄培養(yǎng)液,PBS 洗滌細胞兩遍后熒光顯微鏡或激光共聚焦下進行成像檢測。細胞在染色后應在 1 h 之內(nèi)完成檢測。
3)檢測條件:該分子探針在還原狀態(tài)下最佳激發(fā)波長為 581 nm, 發(fā)射為 591nm;被 Lipid ROS 氧化后最佳激發(fā)波長為 500 nm,發(fā)射在 510nm。因此,在流式分析中檢測通道為 FL1-A;激光共聚焦檢測:氧化態(tài)激發(fā)波長可選488nmFITC)通道;還原態(tài)激發(fā)波長可選 561 nm(TRITC)通道。
實驗案例分析流式分析實驗范例:使用本試劑檢測 10 μM RSL3(鐵死亡經(jīng)典誘導劑)處理 A549 細胞 24 h 后的細胞脂質(zhì)過氧化水平的流式檢測
原位成像實驗范例:
下圖為 RSL3(10 μM)處理A549 細胞 24 h 后,使用本試劑(5μM)對活細胞中脂質(zhì)過氧化水平進行原位染色后激光共聚焦成像結(jié)果。
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