產品描述
BIOHUB 線性聚乙烯亞胺PEI MW40000 轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產品,因其較高的轉染效果,已廣泛應用于AAV,LV和重組蛋白等工業(yè)化生產。
聚乙烯亞胺是一種具有較高陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔兩個碳原子,即每第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿"體(proton sponge),因此,非常容易結合帶負電荷的核酸分子,形成帶正電荷的復合物顆粒,該顆粒與細胞表面陰離子結合,很容易通過內吞作用進入細胞;并且可抵御溶酶體的降解作用,從而提高核酸分子的表達水平。
基本信息 CAS49553-93-7
分子式 (C2H5N)n . xHCl
分子量 40,000 (~22,000 free base)
熔點 73-75℃
溶解性 溶于冷水
不溶于 常用有機溶劑(乙醇、丙酮、四氫呋喃)
形式 白色固體粉末
生物毒性 未知
安全防護 手套,護目鏡,口罩
存儲 粉末至少可以保存一年, PEI內含自由氨基,建議開封后4℃干燥保存,減緩氧化過程。
運輸 常溫運輸
特點 大量實驗數(shù)據(jù)反饋,細胞通用性好,有非常好的轉染效果,尤其對293,CHO細胞系有特別顯著的轉染效果。
配置方法
轉染操作流程:(貼壁細胞轉染方法)
1. 接種細胞: 轉染前一天,用膠原酶(BIOHUB Cat#78CL10002)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔加入的細胞量參考下圖表1,一般18-24小時(sf9細胞為3-4小時)后轉染。轉染時細胞匯合度應至少達到 70~80%以上。轉染前更換為含5%血清的生長培養(yǎng)基。
2. 準備 DNA-PEI 復合物: DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無血清培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。 (稀釋PEI和DNA的體積為培養(yǎng)體積的1/10-1/20, DNA濃度為1ug/ml)
3. 轉染細胞: 直接向每個孔中加入 DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。轉染4-6小時(sf9細胞為2小時 )后,更換為生長培養(yǎng)基。
4. 孵育細胞和分析結果: 在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后最快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合的檢測時間。
5. 轉染 24 h 后,將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中(將細胞稀釋 10 倍 以上),在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆,在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。
轉染操作流程:(懸浮細胞轉染方法)
1. 轉染前準備:懸浮細胞傳代接種于適量含懸浮細胞生長培養(yǎng)基中,合適條件下培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)瓶大小調整細胞密度(例100mL培養(yǎng)瓶,1X10 6 cells/mL),然后旋緊瓶口放入搖床繼續(xù)培養(yǎng),2~4小時后可以進行轉染。
2. 準備 DNA-PEI 復合物:DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無血清培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。
3. 轉染細胞:將PEI-DNA轉染復合物逐滴加入到細胞培養(yǎng)液中,搖勻后旋緊瓶口放回搖床合適培養(yǎng)條件下培養(yǎng)至可以分析檢測。
4. 孵育細胞和分析結果:轉染后一般24-72h即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合的檢測時間。
5. 如果要獲得更多的蛋白產量,有文獻表明轉染后24小時,可以適當稀釋細胞,稀釋比例參考范圍(1:2—1:5)之間,可以增加蛋白產量,稀釋效應與最佳稀釋比率應根據(jù)經(jīng)驗確定。
產品背景
BIOHUB 生產的78Bio PEI是一種優(yōu)化的線性陽離子聚合物轉染試劑,分子量分別為 25000 和 40000,78BioPEI40000 相比 25000 轉染效率高,但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表達系統(tǒng)中,相比于市面上的脂質體 78BioPEI 都表現(xiàn)出高的蛋白表達量(無 論是 96 孔板還是 100L 的細胞反應器),以及更小的細胞毒性、更高的轉染效和更高的可 重復性,并且十分經(jīng)濟的高性價比轉染試劑。產品具有以下特點:
1.轉染效率高,細胞毒性低; 蛋白表達量高;
2.節(jié)約成本:BIOHUB 78 PEI轉染試劑 ,進口品質,親民價格,至少能夠降 40% 的轉染試劑總成本;
3.適用于 HEK293 等真核細胞的轉染;
4.適用于貼壁細胞和懸浮細胞的轉染;
5.適用于有血清和無血清的轉染條件;
6. 無機試劑,無動物源成分;
7. 產品穩(wěn)定,質控嚴格;
8. 工藝流程適用范圍廣,容易優(yōu)化 適合小規(guī)模培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶到大規(guī)模的生物反應器。
產品反饋
注意事項
1. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2. 本產品主要用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
3.加熱或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。當然酸可能不用加那么多,詳細用量可試加一點 ,攪拌看看,足夠溶解就行,不一定需要加到 pH 那么低。
4.一定要溶解充分,溶解不充分會影響后續(xù)的轉染效率.
5.冷凍后可能會影響其后續(xù)轉染效果。
特別提醒:初次使用 78PEI 進行不同基因轉染時應先做預試,優(yōu)化出適合自己實驗的, 最佳 PEI 和 DNA 的比例,通常篩選范圍在 1:1 到 5:1 之間,如果之前用過Polysciences品牌的 PEI,用 78BioPEI 時應適當降低使用濃度。
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
78PEI40000-100mg | 線性聚乙烯亞胺PEI MW40000 | 100mg | BIOHUB |
78PEI40000-1g | 線性聚乙烯亞胺PEI MW40000 | 1g | BIOHUB |
78PEI40000-5g | 線性聚乙烯亞胺PEI MW40000 | 5g | BIOHUB |