BIOHUB 線性聚乙烯亞胺PEI MW25000 轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉(zhuǎn)染效果,已廣泛應(yīng)用于AAV,LV和重組蛋白等工業(yè)化生產(chǎn)。
聚乙烯亞胺是一種具有較高陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔兩個碳原子,即每第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿"體(proton sponge),因此,非常容易結(jié)合帶負(fù)電荷的核酸分子,形成帶正電荷的復(fù)合物顆粒,該顆粒與細(xì)胞表面陰離子結(jié)合,很容易通過內(nèi)吞作用進入細(xì)胞;并且可抵御溶酶體的降解作用,從而提高核酸分子的表達水平。
基本信息
CAS 9002-98-6
分子式 (CH2CH2NH)n效期:3年
運輸 常溫配置方法
轉(zhuǎn)染操作流程:(貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法)
1. 接種細(xì)胞: 轉(zhuǎn)染前一天,用膠原酶(BIOHUB Cat#78CL10002)消化細(xì) 胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細(xì)胞濃度,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置 入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達到 70~80%。
2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物: DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升 至室溫。依據(jù)表 1 所示,用 Opti-MEM ITM或其他適合的無蛋白培 養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線 性 PEI 轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批 DNA 比例可 能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管,一邊將稀釋的線性 PEI 轉(zhuǎn)染 試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI 復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。
3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞: 直接向每個孔中加入 DNA-PEI 復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在 無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴 DNA-PEI 復(fù)合 物。轉(zhuǎn)染 3 h 后,添加?體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。
4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果: 在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染 后最快 7 h 即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。
5. 轉(zhuǎn)染 24 h 后,將細(xì)胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中(將細(xì)胞稀釋 10 倍 以上),在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆,在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。
轉(zhuǎn)染操作流程:(懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法)
1. 轉(zhuǎn)染前準(zhǔn)備:懸浮細(xì)胞傳代接種于適量含懸浮細(xì)胞生長培養(yǎng)基中,合適條件下培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)瓶大小調(diào)整細(xì)胞密度(例100mL培養(yǎng)瓶,1X10 6 cells/mL),然后旋緊瓶口放入搖床繼續(xù)培養(yǎng),2~4小時后可以進行轉(zhuǎn)染。
2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物:DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無血清培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。
3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞:將PEI-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物逐滴加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,搖勻后旋緊瓶口放回?fù)u床合適培養(yǎng)條件下培養(yǎng)至可以分析檢測。
4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果:轉(zhuǎn)染后一般24-72h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。 請自行確定適合的檢測時間。
5. 如果要獲得更多的蛋白產(chǎn)量,有文獻表明轉(zhuǎn)染后24小時,可以適當(dāng)稀釋細(xì)胞,稀釋比例參考范圍(1:1—1:5)之間,可以增加蛋白產(chǎn)量,稀釋效應(yīng)與最佳稀釋比率應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗確定。
產(chǎn)品背景
BIOHUB 生產(chǎn)的78Bio PEI是一種優(yōu)化的線性陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑,分子量分別為 25000 和 40000,78BioPEI40000 相比 25000 轉(zhuǎn)染效率高,但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表達系統(tǒng)中,相比于市面上的脂質(zhì)體 78BioPEI 都表現(xiàn)出高的蛋白表達量(無 論是 96 孔板還是 100L 的細(xì)胞反應(yīng)器),以及更小的細(xì)胞毒性、更高的轉(zhuǎn)染效和更高的可 重復(fù)性,并且十分經(jīng)濟的高性價比轉(zhuǎn)染試劑。產(chǎn)品具有以下特點:
1.轉(zhuǎn)染效率高,細(xì)胞毒性低; 蛋白表達量高;
2.節(jié)約成本:BIOHUB 78 PEI轉(zhuǎn)染試劑 ,進口品質(zhì),親民價格,至少能夠降 40% 的轉(zhuǎn)染試劑總成本;
3.適用于 HEK293 等真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染;
4.適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染;
5.適用于有血清和無血清的轉(zhuǎn)染條件;
6. 無機試劑,無動物源成分;
7. 產(chǎn)品穩(wěn)定,質(zhì)控嚴(yán)格;
8. 工藝流程適用范圍廣,容易優(yōu)化 適合小規(guī)模培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶到大規(guī)模的生物反應(yīng)器。
產(chǎn)品反饋
1. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2. 本產(chǎn)品主要用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
3.加熱或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。當(dāng)然酸可能不用加那么多,詳細(xì)用量可試加一點 ,攪拌看看,足夠溶解就行,不一定需要加到 pH 那么低。
4.一定要溶解充分,溶解不充分會影響后續(xù)的轉(zhuǎn)染效率.
5.冷凍后可能會影響其后續(xù)轉(zhuǎn)染效果。
特別提醒:初次使用 78PEI 進行不同基因轉(zhuǎn)染時應(yīng)先做預(yù)試,優(yōu)化出適合自己實驗的, 最佳 PEI 和 DNA 的比例,通常篩選范圍在 1:1 到 5:1 之間,如果之前用過Polysciences品牌的 PEI,我們的活性是其1.5倍左右,用 78BioPEI 時應(yīng)適當(dāng)降低使用濃度。
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
線性聚乙烯亞胺PEI MW250 | 78PEI25000-100mg | 100mg | BIOHUB |
線性聚乙烯亞胺PEI MW250 | 78PEI25000-1g | 1g | BIOHUB |
線性聚乙烯亞胺PEI MW250 | 78PEI25000-5g | 5g | BIOHUB |