本產(chǎn)品是采用膠體金免疫層析技術(shù)快速檢測(cè)分泌到慢病毒包裝上清中的游離囊蛋白P24,以此作為一個(gè)靈敏的、間接的替代指標(biāo)來顯示病毒產(chǎn)量的檢測(cè)卡,通過對(duì)囊蛋白 P24 的檢測(cè),能快速確定包裝液中的慢病毒滴度是否已經(jīng)達(dá)到收獲需要。該方法僅需要 5~10min 即可得到結(jié)果,與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染方法需要花費(fèi)2-3天相比,具有明顯優(yōu)勢(shì)。
產(chǎn)品性質(zhì)
關(guān)于慢病毒滴度
一個(gè)慢病毒顆粒(Lentiviral Particle, LP)中約有 2000 個(gè) P24 蛋白分子,用以下公式可以計(jì)算慢病毒載體的顆粒數(shù)(LP):
一個(gè) LP 相當(dāng)于:2000×24×10^3/(6×10^23)g of P24=8×10^-5 pg of P24;或者說,1ng P24=1.25×10^7 LPs(≈1.25×10^4-5 TU**)
正常情況下,每 100-1000 LPs 中會(huì)有 1 個(gè)具有感染活性的病毒載體,即 1 TU(Transducing Unit)。
注意:上述公式計(jì)算得到的 LP 值是理論值,檢測(cè)樣品中含有的游離的 P24 蛋白可能會(huì)使該值偏高。
提示:通常上清中病毒含量需要超過 10^6 TU/ml,才能確保濃縮純化后得到足夠濃度的慢病毒載體(一般能濃縮 150 倍左右)。
本法給出的是檢測(cè)線(T 線)強(qiáng)度與功能滴度(Infectious Unit/mL, IFU/mL 或 Transduction Unit/mL, TU/mL)而非物理滴度(Viral Particle/mL, VP/mL)的相關(guān)性。這一相關(guān)性與病毒所轉(zhuǎn)染的細(xì)胞有關(guān)。例如,上圖中,用 3 倍連續(xù)稀釋的包裝上清轉(zhuǎn)染 HEK293 細(xì)胞。72 小時(shí)后,在熒光顯微鏡下觀察表達(dá) ZsGreen1 的細(xì)胞,并用流式細(xì)胞儀測(cè)定HEK293 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率,得到功能滴100µL 滴度為 2 10 6 IFU/ml 的包裝上清加到樣品孔中,10 分鐘后顯深紅色“T 線"。
1. 打開包裝取出檢測(cè)卡,平放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上;
2. 用微量移液器吸取加 80~100µL 包裝上清,滴加到加樣
結(jié)果判定
1. 在可視窗口中,質(zhì)控線(C)和檢測(cè)線(T)均顯色即為陽性;
2. 質(zhì)控線(C)顯色,檢測(cè)線(T)不顯色,檢測(cè)結(jié)果為陰性;
3. 根據(jù) P24 含量的多少,(T)線顏色有所不同,含量越高,顏色越深;含量越低,顏色越淺;
4. 質(zhì)控線(C)不顯色,無論檢測(cè)線 (T)是否顯色,檢測(cè)無效;
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